Маймыл шешек вирусының нақты уақыттағы ПТР жинағы
Өнім мәліметтері
Мақсатты пайдалану
Ол нақты уақыттағы ПТР жүйелерін қолдану арқылы адам сарысуында немесе зақымдану экссудаты үлгілерінде Маймыл шешек вирусын анықтау үшін қолданылады.
Сынақ принципі
Бұл өнім флуоресцентті зонд негізіндегі Taqman® нақты уақыттағы ПТР талдау жүйесі.Арнайы праймерлер мен зондтар маймылша вирусының F3L генін анықтауға арналған.Адамның сақталған геніне бағытталған ішкі бақылау жалған-теріс нәтижелерді болдырмау үшін үлгі жинауды, үлгіні өңдеуді және нақты уақыттағы ПТР процесін бақылайды.Жинақ маймылша вирусын анықтауға қажетті материалдарды қамтитын толық премиксті лиофилденген жүйе: нуклеин қышқылын күшейту ферменті, УДГ ферменті, реакция буфері, арнайы праймер және зонд.
Негізгі мазмұны
Берілген құрамдас бөліктер кестеде берілген.
| Құрамдас бөліктер | Пакет | Ингредиент |
| Маймыл шешек вирусыЛиофилизацияланған премикс | 8 жолақты ПТР түтіктері× 6 қалта | Праймерлер, зондтар, dNTP/dUTP қоспасы, Mg2+, Taq ДНҚ полимеразасы, UDG ферменті |
| MPV оң бақылау | 400 мкл×1 түтік | Мақсатты гені бар ДНҚ тізбегі |
| MPV теріс басқару | 400 мкл×1 түтік | Адам генінің сегменті бар ДНҚ тізбегі |
| Еріткіш ерітінді | 1 мл × 1 түтік | Тұрақтандырғыш |
| Сәйкестік сертификаты | 1 дана | / |
Операция ағыны
1. ҮлгіЖинақ:Үлгіні стерильді түтіктерге сәйкес жинау керек
стандартты техникалық сипаттамалармен.
2. Реагент дайындау (реагент дайындау аймағы)
Жинақтың құрамдастарын алыңыз, күту режимінде пайдалану үшін оларды бөлме температурасында теңестіріңіз.
3. Үлгіні өңдеу (үлгіні өңдеу аймағы)
3.1 Нуклеин қышқылының экстракциясы
Вирустық ДНҚ экстракция жинақтарының сәйкес талаптары мен процедураларына сәйкес нуклеин қышқылын алу үшін 200 мкл сұйықтық үлгілерін, оң бақылау және теріс бақылауды алу ұсынылады.
3.2 Лиофильденген ұнтақ еріткіш және шаблонды қосу
Маймыл шешек вирусының лиофилизацияланған премиксін үлгілер санына сәйкес дайындаңыз.Бір үлгіге лиофилденген премикс ұнтағы бар бір ПТР түтігі қажет.Теріс бақылау және оң бақылау екі үлгі ретінде қарастырылуы керек.
(1) Лиофилизацияланған премикс бар әрбір ПТР түтігіне 15 мкл еріткіш ерітінді қосыңыз, содан кейін әрбір ПТР түтігіне тиісінше 5 мкл экстракцияланған үлгілерді/теріс бақылау/оң бақылау қосыңыз.
(2) ПТР түтіктерін мықтап жабыңыз, лиофилденген ұнтақ толығымен ерігенше және араластырылғанша ПТР түтіктерін қолмен сипап өтіңіз, сұйықтықты жылдам төмен жылдамдықпен центрифугалау арқылы ПТР түтіктерінің түбіне жинаңыз.
(3) Егер анықтау үшін жалпы Нақты уақыттағы ПТР құралын пайдалансаңыз, ПТР түтіктерін күшейту аймағына тікелей тасымалдаңыз;егер анықтау үшін БТК-8 пайдаланылса, онда келесі әрекеттерді орындау қажет: ПТР түтігінен 10 мкл сұйықтықты БТК-8 реакциялық чипінің ұңғымасына өткізіңіз.Бір ПТР түтігі чиптегі бір шұңқырға сәйкес келеді.Тамшуырлау жұмысы кезінде тамшуырдың 90 градус тік болуын қамтамасыз етіңіз.Аэрозольді тосқауыл тамшуырының ұштарын қалыпты күшпен ұңғыманың ортасына қою керек және ол бірінші беріліске жеткенде (көпіршіктерді болдырмау үшін) тамшуырды итеруді тоқтату керек.Ұңғымалар толтырылғаннан кейін барлық ұңғымаларды жабу үшін реакциялық чиптің мембранасын алыңыз, содан кейін чип күшейтуді анықтау аймағына ауыстырылады.
4. ПТР күшейту (анықтау аймағы)
4.1 ПТР түтіктерін/реакция микросхемасын реакциялық резервуарға салыңыз және әрбір реакция ұңғымасының атын сәйкес ретпен орнатыңыз.
4.2 Флуоресценцияны анықтау параметрлері: (1) Маймыл шешек вирусы (FAM);(2) Ішкі бақылау (CY5).
4.3 Келесі циклдік протоколды іске қосыңыз
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio протоколы:
| Қадамдар | Температура | Уақыт | Циклдер | |
| 1 | Алдын ала денатурация | 95℃ | 2 мин | 1 |
| 2 | Денатурация | 95℃ | 10 с | 45 |
| Күйдіру, ұзарту, флуоресценция алу | 60℃ | 30 с | ||
BTK-8 хаттамасы:
| Қадамдар | Температура | Уақыт | Циклдер | |
| 1 | Алдын ала денатурация | 95℃ | 2 мин | 1 |
| 2 | Денатурация | 95℃ | 5 с | 45 |
| Күйдіру, ұзарту, флуоресценция алу | 60℃ | 14 с | ||
5. Нәтижелерді талдау (құралдың пайдаланушы нұсқаулығын қараңыз)
Реакциядан кейін нәтижелер автоматты түрде сақталады.Талдау үшін «Талдау» түймесін басыңыз, сонда құрал нәтиже бағанындағы әрбір үлгінің Ct мәндерін автоматты түрде түсіндіреді.Теріс және оң бақылау нәтижелері келесі «6. Сапаны бақылауға» сәйкес болуы керек.
6. Сапа бақылауы
6.1 Теріс бақылау: FAM арнасында Ct немесе Ct>40, қалыпты күшейту қисығы бар CY5 арнасында Ct≤40.
6.2 Оң бақылау: қалыпты күшейту қисығы бар FAM арнасында Ct≤35, қалыпты күшейту қисығы бар CY5 арнасында Ct≤40.
6.3 Нәтиже жоғарыда аталған барлық критерийлер орындалған жағдайда жарамды болып табылады.Әйтпесе, нәтиже жарамсыз.
Нәтижені түсіндіру
Келесі нәтижелер мүмкін:
| FAM арнасының Ct мәні | CY5 арнасының Ct мәні | Түсіндіру | |
| 1# | Ct немесе Ct>40 жоқ | ≤40 | Маймыл шешек вирусы теріс |
| 2# | ≤40 | Кез келген нәтиже | Маймыл шешек вирусы оң |
| 3# | 40～45 | ≤40 | Қайта тестілеу;егер ол әлі 40~45 болса, 1# ретінде хабарлаңыз |
| 4# | Ct немесе Ct>40 жоқ | Ct немесе Ct>40 жоқ | Жарамсыз |
ЕСКЕРТУ: Жарамсыз нәтиже орын алса, үлгіні жинап, қайта сынау керек.
Тапсырыс туралы ақпарат
| Өнім атауы | мысық.Жоқ | Өлшем | Үлгі | Жарамдылық мерзімі | Транс.& Сто.Темп. |
| Маймыл шешек вирусының нақты уақыттағы ПТР жинағы | B001P-01 | 48 сынақ/жинақ | Сарысу/зақымдану экссудаты | 12 ай | -25～-15℃ |
